LC(液相色譜)
色譜柱通過 “高柱效 + 優選擇性 + 強穩定性" 核心優勢,解決復雜樣品中多組分重疊、痕量目標物難捕獲、定量結果偏差大等痛點,實現從痕量雜質到主成分的精準分離與定性定量,符合食品藥品監管、環境監測、生物醫藥研發等領域的法規要求(如 GMP、EPA 標準),是現代分析檢測的核心分離工具。
分離度是衡量分辨率的關鍵指標,理想分離度需≥1.7 以保障定性定量準確性。其提升依賴三大核心參數:柱效(N)由填料粒徑、柱長決定,選擇性(α)由固定相、流動相匹配度決定,保留因子(k)由鍵合相類型、梯度條件調控。通過優化這些參數,可實現復雜基質中目標峰的基線分離。
高柱效:采用 1.7-3.5μm 超純球形硅膠填料,理論塔板數可達 10?-10?/m,較傳統 5μm 填料柱效提升 30% 以上;
強選擇性:豐富鍵合相(C18、C8、NH?、HILIC 等)適配不同極性、分子量樣品,減少峰重疊;
精準定量:峰形對稱(拖尾因子 0.9-1.1)、批次間 RSD≤1.5%,確保定量結果偏差≤±2%;
寬適配性:兼容反相、正相、離子交換等模式,適配小分子、大分子及痕量雜質分析。
柱長與內徑:250-300mm 柱長適配 10-50 組分復雜樣品,500-600mm 用于難分離體系;4.6mm 內徑為常規選擇,微徑柱(1.0mm)適配 LC-MS/MS,溶劑消耗減少 80%;
填料粒徑:1.7-3.5μm 用于高分辨率需求,5μm 平衡效率與柱壓,大分子樣品(如蛋白)需搭配 300A 大孔徑填料;
顆粒與孔徑:球形填料降低柱壓、延長壽命,孔徑需為分子直徑 3 倍以上(小分子選 80-120A,大分子選 300A)。
基質類型:硅膠基質適配 pH 2-8 常規分析,特殊修飾硅膠可拓展至 pH 1-12;聚合物基質適合強酸堿體系與蛋白分離;
鍵合相與封端:C18/C8 適用于非極性 / 弱極性樣品,NH?/HILIC 適配極性化合物;高封端處理可減少峰拖尾,提升極性樣品分離效果;
載碳量:高載碳量增強非極性化合物保留,低載碳量縮短分析時間。
需求:分離單抗電荷異質性、糖基化修飾體,檢測 0.1% 以下痕量雜質;
選型:1.8μm C18 微徑柱(1.0×50mm)或 HILIC 色譜柱,高封端設計;
效果:LOQ 低至 0.1%,不同修飾體基線分離,滿足生物藥 GMP 合規要求。
需求:同時檢測果蔬中多種農藥殘留(ng/mL 級),排除基質干擾;
選型:3.5μm C18 色譜柱(4.6×150mm),超純硅膠基質;
效果:15 分鐘內分離 20 + 種農藥殘留,回收率 90%-110%,符合國標 GB 2763 要求。
需求:檢測地表水中痕量 VOCs、多環芳烴,檢出限達 μg/L 級;
選型:2.7μm 苯基鍵合相色譜柱,適配反相梯度洗脫;
效果:有效分離復雜基質中目標物,定量 RSD≤2%,滿足 EPA 標準。
需求:分離血漿中極性代謝物或磷脂類化合物,捕獲微弱特征峰;
選型:HILIC 色譜柱(極性代謝物)或專用脂質分析柱,1.7μm 填料;
效果:特征峰信號增強,分離度≥1.7,支持多組分同時定性定量。
梯度條件:復雜樣品采用慢梯度洗脫(斜率 5%-10%/min),避免峰重疊;
流動相選擇:反相體系常用甲醇 - 水 / 乙腈 - 水,添加 0.1% 甲酸改善峰形;
柱溫控制:設置 30-40℃恒定柱溫,減少溫度波動對保留時間的影響。
樣品預處理:通過濾膜(0.45μm)過濾去除顆粒物,避免堵塞色譜柱;
日常沖洗:實驗前后用甲醇 / 乙腈沖洗柱體,避免緩沖鹽殘留;
定期校準:每 3 個月用標準品驗證柱效,理論塔板數下降超 30% 時需更換;
儲存條件:短期用甲醇 / 乙腈(1:1)封存,長期存放于 4℃陰涼處。
該方案通過精準選型與操作優化,實現復雜樣品的高分辨率分離與痕量分析,定性準確率提升至 99% 以上,定量偏差控制在 ±2% 以內,既縮短方法開發周期,又滿足各行業法規合規要求,為研發、質控、監測提供可靠數據支撐。